标准品加样
设置标准孔和样孔，各加不同浓度标准品，分别设空白孔，待测样品孔。在酶标包被版上待测样品孔中先加样品稀释液，再加待测样品。加样时尽量不触及孔壁
加酶温育和配液
每个孔加入酶标试剂，空白孔除外，用封板膜封板后置于37°C温育60分钟，而后配液，将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
洗涤
小心揭掉封板膜，丢弃掉液体，甩干，每个孔中加满洗涤液，静置30秒后丢弃掉，如此重复5次，每次清洗后都要拍干
显色
每个孔先加入显色剂A，而后加入显色剂B,轻轻的震荡混匀，37°C避光显色15分钟（可放在37°C恒温箱中进行避光处理）
终止
每个孔加终止夜，终止反应，此时可以看到液体的颜色由蓝色立马转为黄色，且黄色较淡，如图中所显示的颜色所示
测定
在加终止夜的15分钟以内，以空白孔凋零，450nm波长依序测量各孔的吸光度OD值，以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘制标准曲线，就可进行计算了
