民事申请笔迹鉴定的内容主要有：比较书写动作一般状况特征、文字布局特征、书面语言特征的相同与不同;比较单字或笔画单个特征的相同与不同;比较各组特征的相同与不同;比较各类特征的相同与不同;对于字迹多的检材，比较检验时要对上述四方面的相同特征和不同特征进行精确地统计分析，用数学方法反映书写习惯的量与质方面的异同。比较笔迹特征异同的方法，是以目力观察比较为主，并借助于摄影仪、比较显微镜、幻灯片进行形态比较。
通过对笔迹的检验，可判明文件中的笔迹由几个人所写，是否由某人所写，利用笔迹进行人身同一认定，证实文件的真伪。鉴定时要了解案件有关情况，明确鉴定要求，査验笔迹物证和笔迹样本;分析判断笔迹是否正常，有无伪装或由于其他原因引起的变化;选择能反映书写人书写习惯的稳定的和带有特殊意义的特征;对检材和样本中找出的特征进行比较，找出符合点和差异点;对符合点和差异点的形成原因综合评断;做出鉴定意见并制做鉴定书。
对笔迹鉴定的申请由谁提出，应当根据具体案情的不同而分配。当原告所提供证据达到了证明借贷关系成立或证明了借条系被告所书，完成了举证责任时，被告如否认是其签字则由被告申请作笔迹鉴定;当原告本身不能完成证明责任时，则首先应当由原告自己申请作笔迹鉴定，从而完成自己的证明责任。只有在原告完成了借条是被告所签的举证责任后，被告抗辩时，举证责任才依法发生转移，由被告对抗辩事实进行举证，这是对“谁主张、谁举证”原则的正确理解。
我国法律上明确规定了笔迹鉴定的具体认定情况，涉及到需要对相关材料中的笔迹进行鉴定处理的，还需要基于实际掌握的证据来进行证明，司法鉴定部门需要当事人提交相关检材和样本来进行比对处理，最后才可以形成鉴定报告。
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