1 材料与仪器
1.1 药物复方心脑肾康(XNSK)由本课题组研制,已通过急毒和长毒实验,组方中各活性提取物均购自成都华高天然药物有限公司,包括TP(纯度98%批号:20031108),Egb761(总黄酮/总内酯≥24:6,批号:20030710),PNS(纯度90%,批号:20030911),丹参水溶性提取物(3%RS,批号:20030815),以上各成分按一定比例配成复方;复方丹参片(FFDS): 安徽华佗国药厂,批号:Z34020961。
1.2 试剂MDA,SOD,ROS,NOS,ATPase,考马斯亮蓝试剂盒,均为南京建成生物工程研究所产品。
1.3 仪器DH-1型动物人工呼吸机,722N紫外分光光度计,高速冷冻离心机。
2 方法
2.1 分组及给药将动物随机分为假手术组,缺血模型对照组,XNSK低、中、高剂量组,阳性对照组共6组,各组均于术前10 d开始灌胃给药,1次/d(假手术组和缺血模型对照组给予同体积的生理盐水),术前禁食12 h,第10天最后1次于缺血前60 min给药,参考文献方法[1]制备MIR模型。再灌注 60 min后各组动物实验完毕,摘除部分结扎线以下左心室心肌,冰浴中制备成10%的组织匀浆,按试剂盒说明书,测定各组心肌MDA,SOD,ROS,NOS,ATP酶的含量。部分心肌用10%甲醛溶液固定,制成石蜡切片,苏木素-伊红(HE)染色,病理图像分析仪下观察。
2.2 统计方法实验数据用 ±s 表示,采用SPSS13.0统计软件,结果进行t检验。
3 结果
3个剂量的XNSK用药后均使大鼠的心肌组织MDA的含量及ROS,NOS活性显着降低,SOD和ATP酶活性显着升高(P<0.05),高剂量组的.保护作用强度优于FFDS组(P<0.05)。由图1~3看出,缺血模型对照组心肌排列紊乱,细胞肿胀明显,肌纤维部分断裂,可见心肌细胞成片状坏死,坏死区细胞核碎裂或崩解,周围有炎性细胞浸润。高剂量XNSK组心肌细胞排列规整,部分心肌细胞水肿变性,可见点状的心肌细胞坏死,未见成片状坏死,周围有少量炎性细胞浸润。阳性对照组心肌受损程度与中剂量XNSK 组相近。本研究实验结果表明,对大鼠急性心肌缺血再灌注损伤的保护作用比复方丹参片更强,并有显着性差异且毒副作用小,有望开发成为一种防治心肌缺血损伤的新药,给临床的治疗提供了一种选择。