诉讼时效抗辩应当在一审期间提出。诉讼时效抗辩是指当事人行使诉讼时效抗辩权的法律行为。即对已进入诉讼阶段，对对方当事人违反有关“诉讼时效”相关规定，当事人可以向法院提出“诉讼时效抗辩”，请求驳回对方当事人的诉讼请求。
诉讼时效抗辩是指当事人行使诉讼时效抗辩权的法律行为。即对已进入诉讼阶段，对对方当事人违反有关“诉讼时效”相关规定，当事人可以向法院提出“诉讼时效抗辩”，请求驳回对方当事人的诉讼请求。
且当事人在一审期间未提出诉讼时效抗辩，在二审期间提出的，人民法院不予支持，但其基于新的证据能够证明对方当事人的请求权已过诉讼时效期间的情形除外。
诉讼时效只适用于债权请求权，即当事人可以对债权请求权提出诉讼时效抗辩。所谓债权请求权，是指权利人基于债的关系而产生的、请求特定人为特定行为的权利。
根据相关规定，当事人可以对债权请求权提出诉讼时效抗辩，但对下列债权请求权提出诉讼时效抗辩的，人民法院不予支持：
(1)支付存款本金及利息请求权;
(2)兑付国债、金融债券以及向不特定对象发行的企业债券本息请求权;
(3)基于投资关系产生的缴付出资请求权;
1.提出诉讼时效抗辩的限制。
新规定列举了四种债权请求权，当事人对这四种债权请求权提出诉讼时效抗辩，人民法院不予支持。这四种债权请求权分别是：
①支付存款本金及利息请求权;
②兑付国债、金融债券以及向不特定对象发行的企业债券本息请求权;
③基于投资关系产生的缴付出资请求权;
2.提出诉讼时效抗辩的时间。
当事人应当在一审期间提出诉讼时效抗辩。在二审期间提出诉讼时效抗辩，需同时符合两个条件：一是该证据必须是新的证据，二是该证据能证明对方当事人的请求权已过诉讼时效期间。
相关法律依据：
根据《中华人民共和国民法典》第一百九十二条，诉讼时效期间届满的，义务人可以提出不履行义务的抗辩。
诉讼时效期间届满后，义务人同意履行的，不得以诉讼时效期间届满为由抗辩；义务人已经自愿履行的，不得请求返还。
综上所述，根据国家相关法律规定和要求，对于民事债务纠纷案件通常具有一定的诉讼时效，当事人无法通过协商一致达成共识，向法院提起诉讼需要在纠纷诉讼时效之内，否则法律可能会不予支持，对方也可以以诉讼时效已过为由，在法院审理期间行使诉讼时效抗辩权。
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